【預期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中IL-1α的濃度。

【檢測原理】：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。特異性抗人IL-1α 單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經過孵育，樣本中存在的 IL-1α與固相抗體和檢測抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中IL-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應，在 450 nm 波長測定吸光度值

【主要組成成分】

主要成分

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致

【樣本要求】

  樣本類型和采集

細胞培養(yǎng)上清

 300 g 離心 10 分鐘去除沉淀物，即刻檢測, 或者分裝，-20℃以下貯存。

血清樣本

分離管分離血清。在 1000 g 離心之前，使血樣凝集 30 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或 者分裝，-20℃以下貯存。

血漿樣本

EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1000 g 離心 3 0 分鐘收集樣本。即刻檢測，或者 分裝，-20℃以下貯存。 本試劑盒可能適用于其它生物學樣本。

細胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經過驗證。

注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。 樣本應分裝并貯存于-20℃，以避免IL-1α活性的丟失。如果在 24 小時內檢測，樣本可以 存放在 2 - 8℃。 避免樣本的反復凍融。在檢測前，冷凍樣本應該緩慢地恢復至室溫，輕柔地混勻。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

檢測前請將所有的試劑、樣本恢復至室溫。 如果濃縮的試劑出現(xiàn)結晶，37℃溫浴，直至結晶全部溶解。

1×洗液

吸取 20×濃縮洗液 30 ml 至 1 L 的量筒，加蒸餾水或去離子水至600 ml，輕輕混勻，避免泡 沫。 轉移至干凈瓶內。2 - 25℃貯存，1×洗液可穩(wěn)定 30 天。

1×檢測緩沖液

 吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒，加蒸餾水或去離子水至 50 ml，輕輕混勻，避 免泡沫。 2 - 8℃貯存，1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存 30 天。

檢測抗體 稀釋前充分混勻。根據標準品和待測樣本的數量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的檢 測抗體。 注意：請在 30 分鐘內使用稀釋后的檢測抗體。

 辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素

稀釋前充分混勻。 根據標準品和待測樣本的數量，用 1×檢測緩沖液按 1：100 稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標記的 鏈霉親和素。 注意：請在 30 分鐘內使用稀釋后的辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。

樣本稀釋

如果樣本需要稀釋，請用試劑盒提供的 1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本，用細胞培養(yǎng)基稀釋 細胞培養(yǎng)上清。

人白介素1α(IL-1α)標準品

用蒸餾水或去離子水重溶人白介素1α(IL-1α)標準品，重溶體積標注在人白介素1α(IL-1α)標準品的標簽上。輕柔 地渦旋震蕩，確保充分混勻，重溶后標準品的濃度為4000 pg/ml。重溶后靜置 10 - 30 分鐘。稀釋 前充分混勻。 請使用聚丙烯管進行標準品稀釋。