人胚腎細胞：早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1——4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主?？杀磉_異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。細胞復(fù)蘇時速度要快，使之迅速通過細胞最易受損的-5——0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。其操作步驟與原理如下：

　　一、人胚腎細胞操作步驟

　　1、凍存

　?。?）消化細胞(同實驗二)，將細胞懸液收集至離心管中。

　　（2）1000rpm離心10分鐘，棄上清液。

　?。?）沉淀加含保護液的培養(yǎng)，計數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。

　?。?）將懸液分至凍存管中，每管1 ml。

　?。?）將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴，否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。

　　（6）貼上標簽，寫明細胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。

　　（7）按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。

　　注意：操作時應(yīng)小心，以免液氮凍傷。液氮定期檢查，隨時補充，絕對不能揮發(fā)干凈，一般30立升的液氮能用1——1.5月。

　　2、復(fù)蘇

　　（1）細胞實驗室進行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。

　?。?）培養(yǎng)液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒溫水浴箱370C預(yù)熱。

　?。?）二甲基亞砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，備用。

　　二、人胚腎細胞原理

　　在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。