液相色譜中的許多問題都能在譜圖上反映出來，其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。

　　得到完美的色譜圖要跳過哪些坑？HPLC譜圖常見故障及解決方法！

　　一、拖尾峰

　　1.篩板阻塞，柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。

　　2.色譜柱塌陷，是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

　　3.有污染，即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達(dá)終點稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。

　　4.流動相PH值選擇錯誤，如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。

　　二、前沿峰

　　1.樣品過載，被保留的樣品在正常出峰時間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。

　　2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)，當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動相時會出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動相的洗脫力較弱時會出現(xiàn)前沿峰。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。

　　3.色譜柱損壞，色譜柱柱效損失，不能對物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。

　　4.在大峰前有小峰出現(xiàn)，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動相洗脫梯度。

　　三、基線漂移

　　1.柱溫波動，即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動，通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。

　　2.流動相不均勻，流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動相在使用前進(jìn)行脫氣處理。

　　3.流通池被污染或有氣體。用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

　　4.流動相配比不當(dāng)或流速變化。更改配比或流速，為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

　　5.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)，以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

　　四、出現(xiàn)寬峰

　　1.色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

　　2.柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。

　　3.檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大。減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池。

　　五、基線噪音

　　1.在流動相、檢測器或泵中有空氣（尖銳峰）。流動相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。

　　2.漏液。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

　　3.流動相混合不完全。用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

　　4.溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。

　　5.在同一條線上有其他電子設(shè)備（偶然噪聲）。斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。采用精密級穩(wěn)壓電源。

　　六、分離度不夠

　　1.流動相梯度洗脫設(shè)置不合理。優(yōu)化梯度洗脫程序。

　　2.流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間變化）。重新配置流動相。

　　3.保護(hù)柱或分析柱阻塞。去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析，如果必要則更換保護(hù)柱；如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?；如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。