分光光度計，又稱(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源

光度定義

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū)，(2)380~780nm的可見光區(qū)，(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>;~400cm<-1>;)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外、可見光分光光度計(或)、或。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定

儀器組成

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

原理

分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關系如下式:

a=-lg(i/i。)=-lgt=klc

式中 :a 為吸光度;

i。為入射的單色光強度;

i 為透射的單色光強度;

t 為物質(zhì)的透射率;

k 為摩爾吸收系數(shù);

l 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;

儀器特點

獨特的雙光路、雙光束光學系統(tǒng)，儀器分辨率更高，雜散光更低，穩(wěn)定性、可靠性更強，分析更加準確

采用320*240位點陣式高亮6 "液晶顯示器，顯示清晰，信息完備

獨特的長光程光路設計，使儀器分辨率更高，尤其適合微量測試 強大的數(shù)據(jù)處理功能，使測試結果能得到充分的應用，用戶編輯更為簡單快捷

采用懸架式光學系統(tǒng)設計，整體光路獨立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上，底板的變形和外界的震動對光學系統(tǒng)不產(chǎn)生任何影響，從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性

采用同步正弦機構，波長準確度高，重復性好

采用arm系統(tǒng)

0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動可選,滿足不同用戶的測量需求

24位高速、高精度a/d轉換，儀器精度更高、反應速度更快

主要元件采用進口配置，使儀器雜散光更低、穩(wěn)定性、可靠性更強

功能更加強大，主機可獨立完成光度測量、定量測量、光譜掃描、動力學、dna/蛋白質(zhì)測試，多波長測試及數(shù)據(jù)打印等功能

操作方法

1.接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。

2.將靈敏度開關調(diào)至"1"檔(若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到"0"時，需選用較高檔。)

3.根據(jù)所需波長轉動波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)"100"調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

注意事項

1.該儀器應放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

2.使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。

3.在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于"0"刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。

日常維護

分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護和對主要技術指標的簡易測試方法，自己經(jīng)常對儀器進行維護和測試，以保證儀器工作在最佳狀態(tài)。

一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降;造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應定期加以校正。應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。

二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。

三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑，最后，恢復原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。

折疊編輯本段維護保養(yǎng)

分光光度計作為一種精密儀器，在運行工作過程中由于工作環(huán)境，操作方法等種種原因，其技術狀況必然會發(fā)生某些變化，可能影響設備的性能，甚至誘發(fā)設備故障及事故。因此，分析工作者必須了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患，對已產(chǎn)生的故障及時維修才能保證儀器設備的正常運行。

1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正"0"和"100%"點。然后再測量。

2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。

3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

4)操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

5)1900型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩(wěn)。

6)放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零

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